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Controle microbiológico de gelo: por que a demanda cresce antes do período mais quente
A água em estado sólido é frequentemente percebida como um insumo inerte, seguro e biologicamente inativo. Essa percepção, enraizada no senso comum e em abordagens operacionais simplistas, ignora um princípio físico e microbiológico fundamental: o congelamento da água não equivale à sua esterilização. Bactérias, vírus, fungos e protozoários patogênicos possuem mecanismos de adaptação estrutural e metabólica que lhes permitem sobreviver a baixas temperaturas, permanecendo viáveis em matrizes de gelo por longos períodos. Quando esse gelo é fundido — seja no contato direto com alimentos, no resfriamento de mostras laboratoriais ou na conservação de insumos biológicos —, os microrganismos retomam sua atividade metabólica e reprodutiva, representando um vetor crítico de contaminação cruzada.
Nos meses que antecedem a primavera e o verão, observa-se uma elevação sistemática na procura por ensaios e consultorias de controle microbiológico focado em matrizes de gelo. Essa movimentação preventiva por parte de indústrias alimentícias, redes hospitalares, laboratórios de pesquisa e estabelecimentos comerciais não é fortuita. Trata-se de uma resposta estratégica a dois fatores determinantes: a sazonalidade do consumo e as dinâmicas operacionais de preparação de estoque e manutenção industrial.
Conforme as temperaturas médias começam a subir, a demanda por refrigeração direta e consumo de bebidas resfriadas aumenta exponencialmente. Para atender a essa demanda sazonal sem gargalos no abastecimento, a cadeia produtiva precisa operacionalizar suas estruturas com antecedência. Isso envolve a limpeza pesada, higienização e validação microbiológica de geradores de gelo, reservatórios e linhas de tubulação que muitas vezes permaneceram com uso reduzido ou ociosos durante o inverno. O período de pré-sazonalidade torna-se, portanto, a janela crítica para a realização de auditorias, adequação a parâmetros normativos e auditoria de processos analíticos.
Garantir a inocuidade do gelo demanda uma abordagem analítica interdisciplinar. Trata-se de tratar a água congelada não apenas como um produto final, mas como um ponto crítico de controle (PCC) em ecossistemas industriais e de saúde. A negligência no monitoramento dessa matriz pode resultarem surtos de infecções alimentares, perda de integridade de amostras farmacêuticas e severas sanções regulatórias. O objetivo deste artigo é analisar profundamente os fundamentos biológicos, a evolução regulatória, os impactos industriais e as metodologias de análise que sustentam a urgência do controle microbiológico preventivo de gelo antes do período mais quente do ano.
Contexto Histórico e Fundamentos Teóricos
A evolução da percepção do gelo como matriz biológica
Historicamente, o gelo foi utilizado pela humanidade como um meio natural de conservação muito antes do entendimento da microbiologia moderna. Na Antiguidade e durante o século XIX — na era do comércio natural de gelo extraído de lagos congelados na América do Norte e Europa —, o frio era associado à purificação e preservação da matéria orgânica. Acreditava-se que o gelo natural era purificado pelo próprio processo de congelamento.
Com o advento da microbiologia no final do século XIX e início do século XX, impulsionado pelos trabalhos de Louis Pasteur e Robert Koch, cientistas começaram a questionar a Inocuidade do gelo natural. Estudos pioneiros demonstraram que epidemias de febre tifoide e cólera em cidades industriais estavam diretamente ligadas ao consumo de gelo colhido em corpos d'água poluídos por efluentes domésticos. A introdução da refrigeração mecânica e da fabricação artificial de gelo no século XX reduziu substancialmente a dependência de fontes naturais indomadas, mas introduziu uma nova variável: a contaminação em processos fabris e em sistemas prediais de distribuição de água.
A virada do século XXI consolidou a visão de que o gelo é um alimento ou insumo de processo sob o ponto de vista sanitário. Agências de vigilância sanitária em todo o mundo passaram a exigir que o gelo destinado ao consumo humano ou ao contato com insumos sensíveis cumprisse os mesmos padrões de potabilidade exigidos para a água potável, desencadeando a consolidação de marcos regulatórios específicos.
Resistência e viabilidade microbiológica a baixas temperaturas
O comportamento de microrganismos expostos ao congelamento é complexo e varia de acordo com a espécie, a velocidade de resfriamento e a composição da matriz aquosa. O processo de formação de gelo envolve a cristalização da água livre. À medida que os cristais de gelo se formam, ocorre a exclusão de solutos, criando microambientes com alta concentração salina e osmolaridade elevada antes do congelamento total.
O congelamento induz estresse celular por dois mecanismos principais:
Dano mecânico: A formação de cristais de gelo intracelulares ou extracelulares pode puncionar e romper a membrana plasmática e a parede celular de bactérias e fungos.
Estresse osmótico e desidratação: A concentração de solutos no líquido residual não congelado força a saída de água do interior da célula por osmose, levando à
desnaturação proteica e alteração do pH interno.
Apesar desses estresses, muitas espécies bacterianas e virais desenvolveram estratégias de sobrevivência. A resposta ao choque térmico frio (cold shock response) envolve a síntese de proteínas específicas (CSPs - Cold Shock Proteins) que atuam como chaperonas RNA/DNA, estabilizando a tradução e a replicação celular em baixas temperaturas.
Além disso, bactérias Gram-negativas (como Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli e Salmonella spp.) e esporos fúngicos frequentemente entram em um estado fisiológico denominado Viável Mas Não Cultivável (VBNC). Nesse estado, a bactéria perde a capacidade de formar colônias em meios de cultura tradicionais, mas mantém sua integridade estrutural, atividade metabólica basal e infectividade. Quando o gelo derrete e atinge temperaturas favoráveis, a bactéria sai do estado VBNC e retoma a replicação ativa, representando um risco oculto que métodos tradicionais de cultivo por vezes falham em detectar imediatamente.
O papel dos biofilmes no ciclo do gelo
Um dos maiores desafios no controle microbiológico de máquinas e sistemas de produção de gelo é a presença de biofilmes. Biofilmes são comunidades de microrganismos aderidas a superfícies sólidas e envoltas por uma matriz de substâncias poliméricas extracelulares (EPS) auto-produzida, composta por polissacarídeos, proteínas e DNA extracelular.
Nas máquinas de gelo, os biofilmes se instalam em componentes críticos:
Reservatórios de água de alimentação;
Linhas de distribuição e tubulações de PVC ou aço inoxidável;
Placas evaporadoras e bandejas de gotejamento;
Bicos injetores e trituradores.
A matriz de EPS funciona como uma barreira física e química defensiva. Ela protege as bactérias encerradas em seu interior contra a ação de sanitizantes químicos (como soluções cloradas ou peracéticas) e contra as flutuações térmicas da máquina. Durante o funcionamento das máquinas de gelo, o fluxo contínuo de água fornece nutrientes ao biofilme, enquanto as forças de cisalhamento provocam o desprendimento periódico de agregados bacterianos. Esses agregados são incorporados ao gelo em formação, resultando em uma contaminação heterogênea e contínua do produto final.
Arcabouço normativo e legislação aplicável
A regulamentação do gelo abrange normas nacionais e internacionais que o enquadram como água destinada ao consumo humano ou como ingrediente alimentar.
No cenário brasileiro, a Portaria GM/MS nº 888, do Ministério da Saúde, dispõe sobre os procedimentos de controle e de vigilância da qualidade da água para consumo humano e seu padrão de potabilidade. Ela estabelece que qualquer água ou gelo para consumo humano deve estar isento de coliformes totais e Escherichia coli em alíquotas de 100 mL, além de limitar a contagem de bactérias heterotróficas a patamares estritos para garantir a integridade do sistema de distribuição.
Adicionalmente, a Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA) regula a qualidade microbiológica por meio da Resolução da Diretoria Colegiada (RDC) nº 724 e da Instrução Normativa (IN) nº 161, que estabelecem os padrões microbiológicos para alimentos. O gelo fabricado para entrar em contato direto com alimentos (por exemplo, na conservação de pescados ou em processos frigoríficos) deve cumprir os critérios de inocuidade, sem a presença de patógenos como Salmonella spp. e Listeria monocytogenes.
Internacionalmente, diretrizes do Codex Alimentarius, da Food and Drug Administration (FDA) nos Estados Unidos e as diretrizes da World Health Organization (WHO) corroboram a obrigatoriedade de que o gelo utilizado na cadeia alimentar e na saúde atenda aos mesmos padrões físico-químicos e microbiológicos da água potável purificada.
Importância Científica e Aplicações Práticas
Impactos nos setores industrial, farmacêutico e alimentício
A qualidade microbiológica do gelo impacta verticalmente diferentes setores produtivos, com implicações econômicas e operacionais significativas.
1. Indústria Alimentícia e Pesqueira
Na indústria do pescado e no processamento de carnes, o gelo é utilizado em abundância para o resfriamento rápido da matéria-prima logo após a captura ou abate. A carga microbiológica do gelo atua diretamente na deterioração dos alimentos (spoilage). Bactérias psicrotróficas, como Pseudomonas e Shewanella putrefaciens, adaptadas a multiplicar-se sob refrigeração, secretam enzimas proteolíticas e lipolíticas que degradam o tecido animal, alterando organolepticamente o produto e reduzindo drasticamente sua vida de prateleira (shelf-life). Se o gelo utilizado contiver patógenos como Listeria monocytogenes, o risco de contaminação cruzada torna-se eminente, podendo levar a recalls massivos e interdições sanitárias.
2. Setor Farmacêutico e Biotecnológico
No desenvolvimento e na logística de produtos farmacêuticos, vacinas e reagentes de diagnóstico, a manutenção da cadeia de frio frequentemente emprega bolsas de gelo (ice packs) ou gelo em escamas para o transporte e armazenamento temporário. Embora o gelo raramente entre em contato direto com o princípio ativo dentro de frascos ampolas estéreis, a presença de alta carga microbiana ou endotoxinas na superfície externa de embalagens de gelo pode comprometer áreas limpas (clean rooms) e salas de envase durante o desembalamento de insumos.
3. Ambiente Hospitalar e Saúde
Em hospitais e clínicas, o gelo é empregado no resfriamento de órgãos para transporte de transplantes, no alívio de quadros inflamatórios e na hidratação de pacientes imunocomprometidos. Surtos de infecção hospitalar por Pseudomonas aeruginosa e Legionella pneumophila associados ao consumo ou aplicação de gelo proveniente de máquinas desprovidas de higienização adequada são amplamente documentados na literatura médica internacional. Em pacientes neutropênicos ou sob cuidados intensivos, a ingestão de gelo contaminado pode evoluir para bacteremias graves.
A dinâmica da pré-sazonalidade: Por que a demanda cresce antes do calor?
A correlação entre o aumento de temperatura e a contaminação microbiológica é uma das premissas centrais da microbiologia aplicada. No entanto, a razão pela qual a demanda por análises laboratoriais e controle microbiológico atinge seu pico antes da chegada do período mais quente (final do inverno e ao longo da primavera) fundamenta-se em estratégias preventivas de gestão de risco.
Aumento da temperatura ambiente e estresse térmico dos sistemas de refrigeração:No verão, as temperaturas ambientais elevadas forçam os sistemas de refrigeração a operar na capacidade máxima. O aumento da temperatura do ar e da água de entrada dificulta a manutenção de temperaturas internas ultra-baixas contínuas nos reservatórios, criando bolsões térmicos onde microrganismos psicrotróficos e mesófilos encontram condições para proliferação rápida.
Período de ociosidade e estagnação da água durante os meses frios:Durante o outono e o inverno, o consumo de gelo cai substancialmente. Muitas máquinas operam com vazão reduzida ou são desligadas parcialmente. A estagnação da água dentro de tubulações e reservatórios elimina o arraste mecânico do fluxo contínuo, reduz o nível de desinfetante residual (como o cloro livre) e cria o ambiente propício para o desenvolvimento de biofilmes maduros nas superfícies internas do equipamento.
Validação prévia do processo produtivo:Auditorias de qualidade e protocolos de Análise de Perigos e Pontos Críticos de Controle (APPCC/HACCP) exigem que qualquer intervenção corretiva ocorra antes da entrada na fase de pico produtivo. Identificar uma contaminação por E. coli ou coliformes em pleno janeiro resulta na paralisação da produção, perda de estoques, prejuízos financeiros substanciais e incapacidade de atender à demanda de mercado. Realizar a amostragem, monitoramento e higienização profunda no período pré-sazonal garante que os equipamentos comecem a rodar em capacidade máxima validados e biologicamente seguros.
Estudo de Caso Hipotético: Validação Preventiva em uma Planta de Processamento de Pescado
Para ilustrar a relevância prática do controle preventivo, considere uma planta de processamento e exportação de pescados localizada na região costeira. A fábrica opera com três geradores industriais de gelo em escamas, produzindo cerca de 15 toneladas diárias.
Durante o inverno, apenas uma das máquinas permaneceu em operação com 30% da capacidade. As outras duas máquinas ficaram desativadas por quatro meses com água residual estagnada nas tubulações.
No início da primavera, antecipando a safra de pesca e a elevação da temperatura do mar, a gestão de qualidade da planta contratou um laboratório especializado para realizar o diagnóstico microbiológico antes do religamento geral dos equipamentos.
Resultados da Amostragem Inicial (Antes da Intervenção):
Ponto de Amostragem | Bactérias Heterotróficas (UFC/mL) | Coliformes Totais (em 100 mL) | Pseudomonas aeruginosa (em 100 mL) |
Água de Entrada (Rede) | 12 | Ausente | Ausente |
Gelo Máquina 1 (Em uso) | 85 | Ausente | Ausente |
Gelo Máquina 2 (Ociosa) | $3{,}2 \times 10^3$ | Presente | Presente ($1{,}4 \times 10^2$ UFC) |
Gelo Máquina 3 (Ociosa) | $8{,}7 \times 10^3$ | Presente | Presente ($5{,}1 \times 10^2$ UFC) |
Padrão de referência (Portaria GM/MS nº 888): Bactérias Heterotróficas < 500 UFC/mL; Coliformes Totais e P. aeruginosa: Ausentes em 100 mL.
Diagnóstico e Ações Corretivas:
O laudo analítico revelou contaminação crítica por biofilme nas máquinas 2 e 3. A presença de Pseudomonas aeruginosa nas máquinas ociosas indicava que, se esses equipamentos tivessem sido colocados em operação direta no verão sem sanitização e validação prévias, toneladas de pescado teriam sido contaminadas, resultando em perda de carga exportável e contaminação do ambiente de fábrica.
A planta executou um protocolo de sanitização por choque utilizando solução peracética a 2%, seguido de enxágue com água purificada, troca de filtros de carvão ativado e substituição de conexões flexíveis de silicone. Uma nova rodada analítica confirmou a eliminação da carga microbiana, validando as máquinas para a operação no verão.
Metodologias de Análise Microbiológica e Físico-Química
O controle de qualidade em matrizes de gelo requer cuidados metodológicos particulares desde a fase de amostragem até a interpretação dos resultados analíticos. O gelo não pode ser tratado analiticamente como uma amostra de água convencional até que o processo de fusão seja concluído sob condições estritamente controladas.
Amostragem e fusão controlada da amostra
A amostragem de gelo deve seguir protocolos rigorosos (como os descritos no Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater - SMWW) para evitar a introdução de contaminantes ambientais.
Coleta Asséptica: Utilização de luvas estéreis, pás de amostragem previamente autoclavadas ou esterilizadas por radiação, e recipientes de polipropileno de alta densidade ou vidro borossilicato estéreis contendo tiossulfato de sódio (para neutralizar o cloro residual e evitar que o sanificante continue agindo e mascarando os resultados de viabilidade durante o transporte).
Processo de Fusão: A amostra de gelo deve ser derretida sob refrigeração controlada ($2^\circ\text{C}$ a $8^\circ\text{C}$) ou à temperatura ambiente pelo menor tempo possível, prevenindo o choque térmico excessivo e a multiplicação acelerada de eventuais organismos presentes. O volume de água resultante da fusão é então submetido aos ensaios microbiológicos e físico-químicos.
Principais métodos analíticos microbiológicos
1. Filtração por Membrana (MF)
É o método padrão de referência para análise bacteriológica de água e gelo com baixa turbidez (conforme normas ISO 9308-1 para E. coli e coliformes, e ISO 16266 para Pseudomonas aeruginosa).
A água resultante da fusão do gelo (geralmente 100 mL) é filtrada sob vácuo através de uma membrana de nitrato de celulose ou acetato de celulose com porosidade estéril de $0{,}45\ \mu\text{m}$. Os microrganismos ficam retidos na superfície da membrana, que é subsequentemente transferida para placas de Petri contendo meios de cultura seletivos e diferenciais (como Agar M-Endo, Agar MacConkey, ou Agar Cetrimide).
2. Ensaios com Substratos Cromogênicos e Fluorogênicos (ex.: Colilert)
Métodos enzimáticos padronizados pela AOAC e SMWW 9223B fundamentam-se na detecção de enzimas específicas:
$\beta$-galactosidase: Enzima produzida pelo grupo dos coliformes que cliva o substrato cromogênico ONPG (ortho-nitrophenyl-$\beta$-D-galactopyranoside), alterando a cor do meio de incolor para amarelo.
$\beta$-glucuronidase: Enzima específica de Escherichia coli que cliva o substrato fluorogênico MUG (4-methylumbelliferyl-$\beta$-D-glucuronide), gerando fluorescência azul sob luz ultravioleta (366 nm).
Essa metodologia reduz o tempo analítico de 48 para 18-24 horas, oferecendo alta especificidade e eliminação da necessidade de etapas de confirmação bioquímicas complexas.
3. PCR em Tempo Real (qPCR) e Métodos Moleculares
Para detecção rápida e identificação de cepas patogênicas ou organismos em estado VBNC que não crescem em ágar tradicional, a Reação em Cadeia da Polimerase Quantitativa (qPCR) destaca-se na rotina analítica avançada. O DNA total da amostra extraída do gelo é amplificado utilizando primers e sondas marcadas com fluoróforos dirigidos a genes específicos (ex.: gene uidA ou malB em E. coli).
A grande vantagem do qPCR é a capacidade de fornecer diagnósticos quantitativos em poucas horas, além de permitir o rastreamento epidemiológico molecular das fontes de contaminação através do sequenciamento genético.
4. ATP-metria por Bioluminescência
Utilizado principalmente para validação imediata no chão de fábrica após etapas de higienização de equipamentos. O ensaio mede o trifosfato de adenosina (ATP) total presente na amostra de água de fusão do gelo. A enzima luciferase converte o ATP e a luciferina em luz, cuja intensidade é mensurada em Unidades Relativas de Luz (URL) por um luminômetro. Embora não diferencie contaminação microbiológica de resíduos orgânicos, oferece uma resposta instantânea em termos de higiene geral do sistema.
Métodos complementares de análise físico-química
A qualidade microbiológica está associada às propriedades físico-químicas da água utilizada para fabricar o gelo. Alterações nos parâmetros físico-químicos frequentemente servem como indicadores de contaminação estrutural no sistema:
Carbono Orgânico Total (TOC - Total Organic Carbon): Determinado por oxidação catalítica por combustão ou persulfato/UV seguida de detecção por infravermelho não dispersivo (NDIR). O TOC mensura a quantidade total de matéria orgânica dissolvida e suspensa. Níveis elevados de TOC fornecem o suporte nutricional necessário para o crescimento bacteriano e a maturação de biofilmes nas tubulações do gerador de gelo.
Condutividade Elétrica e pH: Determinam a carga iônica e a estabilidade físico-química do gelo.
Turbidez: Mensurada por nefelometria ( expressa em UNT - Unidades Nefelométricas de Turbidez). A presença de partículas em suspensão pode proteger fisicamente os microrganismos da ação de agentes desinfetantes como cloro e luz ultravioleta.
Quadro Comparativo de Metodologias Analíticas
Método | Target/Parâmetro | Tempo de Resposta | Vantagens | Limitações |
Filtração por Membrana | Bactérias viáveis (UFC) | 24 - 48 horas | Método de referência padronizado; baixo custo por ensaio. | Não detecta células no estado VBNC; resposta demorada. |
Substratos Cromogênicos | Coliformes e E. coli | 18 - 24 horas | Alta sensibilidade e especificidade; leitura direta e intuitiva. | Requer incubação; custo por amostra intermediário. |
qPCR (Molecular) | DNA de patógenos específicos | 2 - 4 horas | Diagnóstico ultra-rápido; detecta organismos VBNC. | Maior custo; detecta DNA de células mortas (necessita corantes de viabilidade). |
ATP-metria | Carga orgânica/biológica total | < 1 minuto | Resultado imediato em campo; ideal para verificação de limpeza. | Não identifica espécies microbiológicas; sensível a interferentes orgânicos. |
Análise de TOC | Carbono Orgânico Total | 10 - 15 minutos | Monitora o potencial de formação de biofilmes e carga orgânica. | Ensaio físico-químico indireto; não avalia viabilidade celular. |
Considerações Finais e Perspectivas Futuras
O controle microbiológico do gelo ultrapassa a simples exigência do cumprimento de checklists de vigilância sanitária; trata-se de um pilar da segurança operacional em saúde pública e processos industriais. A falsa premissa de que o congelamento inativa e purifica a água mascara riscos biológicos relevantes, os quais tendem a ser amplificados com a chegada dos períodos de altas temperaturas.
A elevação da busca por auditorias, análises laboratoriais e consultorias microbiológicas nos meses de pré-sazonalidade reflete uma postura de gestão preventiva amadurecida. Antecipar-se ao aumento das temperaturas permite identificar biofilmes latentes, sanear instalações ociosas e validar equipamentos antes que operem sob capacidade máxima, evitando perdas financeiras, interrupção na cadeia de suprimentos e contaminações com potencial impacto sanitário.
No campo da inovação e tendências tecnológicas para a conservação e fabricação de gelo, observa-se o avanço de soluções disruptivas:
Superfícies Anti-biofilme em Geradores de Gelo: Aplicação de revestimentos nanoestruturados de dióxido de titânio ($\text{TiO}_2$) e polímeros modificados com propriedade bactericida e anti-adesiva no interior das tubulações e evaporadores, impedindo a adesão primária de microrganismos.
Sistemas Internos de Desinfecção por UV-LED e Ozônio Contínuo: Integração de lâmpadas UV-LED de baixa potência e geradores microfluidizados de ozônio dentro dos reservatórios de água e bandejas das máquinas de gelo, promovendo a oxidação contínua da matéria orgânica e inativação microbiana em tempo real, sem deixar resíduos químicos.
Monitoramento por Biosensores em Tempo Real: Desenvolvimento de sensores ópticos e eletroquímicos acoplados ao Internet of Things (IoT) instalados diretamente nas linhas de distribuição de água, capazes de emitir alertas precoces à equipe de manutenção sobre o início da formação de biofilmes antes do congelamento da água.
O fortalecimento da cultura de controle preventivo exige um esforço contínuo de educação técnica, modernização das metodologias analíticas pelos laboratórios de ensaio e rigidez na manutenção preditiva industrial. Considerar o gelo como uma matriz alimentar de alto risco microbiológico e tratá-lo com rigor técnico ao longo de todo o ano — com especial atenção no período que antecede as estações mais quentes — é a garantia indispensável de excelência técnica, conformidade regulatória e proteção à saúde pública.
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FAQs – Perguntas Frequentes
O congelamento da água elimina microrganismos patogênicos no gelo?
Não. O congelamento não equivale à esterilização. Bactérias, vírus e fungos sobrevivem a baixas temperaturas por meio de adaptações metabólicas e, ao ocorrer a fusão do gelo, retomam sua atividade reprodutiva.
Por que a demanda por controle microbiológico do gelo cresce antes do calor?
É uma estratégia preventiva para mitigar a sazonalidade e o estresse térmico, permitindo higienizar sistemas ociosos e validar geradores de gelo antes do pico de produção no verão.
O que são os microrganismos em estado VBNC no gelo?
É o estado “Viável Mas Não Cultivável”, no qual bactérias perdem a capacidade de formar colônias em meios tradicionais, mas mantêm sua integridade estrutural e infecciosidade após o derretimento.
Qual é o impacto dos biofilmes nas máquinas de geradores de gelo?
Biofilmes formados por matrizes poliméricas protegem as bactérias contra sanitizantes e desprendem agregados microbianos contínuos que contaminam o gelo em formação.
Quais métodos analíticos são utilizados para detectar contaminação no gelo?
Incluem a filtração por membrana, ensaios com substratos cromogênicos, PCR em tempo real (qPCR), ATP-metria e análises físico-químicas de Carbono Orgânico Total (TOC).
Quais normas regulamentam a qualidade do gelo e da água no Brasil?
A Portaria GM/MS nº 888 do Ministério da Saúde para potabilidade, além da RDC nº 724 e da IN nº 161 da ANVISA para padrões microbiológicos em alimentos.
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